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1、干燥制品短期内可置于-20℃下保存,长期保存应置于-80℃下保存。
2、溶解后的RNA长期保存应置于-80℃下保存。
1、干燥制品短期内可置于-20℃下保存,长期保存应置于-80℃下保存。
2、溶解后的RNA长期保存应置于-80℃下保存。
1、干燥制品很稳定,常温保存可达数月,尽量采取-20℃下保存。
2、溶解后的DNA短期(8 天左右)内使用可置于4℃下保存,长期保存应分份置于-20℃下保存,避免反复冻融。
RNA浓度提取得率不高的常见三个原因:
1、组织或者细胞样本中的RNA含量偏低。
2、裂解不充分或样品起始量过高或过低。
3、匀浆处理不充分或沉淀时间不够。
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DNA 测序样品的溶解可以用灭菌蒸馏水或者用适量的TE缓冲液。
核酸定量普遍采用的方法是紫外分光光度法:测定核酸溶液在260 nm的光吸收,样品溶液吸收光的量(吸光度)正比于溶液中溶质的量。吸光度与溶液中核酸浓度间的转换关系依据Lambert-Beer定律:
A=ε260 C L
其中:
A:吸光度(OD)ε260:溶液中核酸在260 nm的摩尔消光系数(单位,L/mol·cm)
C:溶液浓度(单位,mol/L)
L:光路长度(单位,cm)
应用Lambert-Beer定律对核酸进行定量时,必须保证测定值在核酸浓度与吸光度值呈直线关系的范围内,否则计算结果与实际浓度之间会出现偏差。
普通的分光光度计(待测溶液装在样品池中),测定样品溶液浓度准确的直线范围通常是吸光度值在0.1-1.0之间,如果待测样品溶液浓度过大,必须进行适当稀释,以保证测定值小于1.0。同样,待测样品溶液的浓度也不能太低,如果测定值小于0.1,测定准确度会降低(测定值重复性降低)。
保证测定值在核酸浓度与吸光度值呈直线关系的范围内,再根据原溶液的总体积与稀释倍数计算该溶液的总OD值。分光光度计上显示的数值为每毫升溶液中的OD值。当测定200 ml的DNA/RNA溶液,未稀释,OD值为1.5时,则该溶液的总OD值(A)为:
A=0.2 ml×1.5 OD/ml=0.3 OD 。